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幽门螺杆菌培养及药敏检测试剂盒

什么是幽门螺杆菌?

 幽门螺杆菌病是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的细菌。1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜活检组织中分离成功,是目前所知能够在人胃中生存的唯一微生物种类。幽门螺杆菌会引起胃炎、消化道溃疡、淋巴增生性胃淋巴瘤等疾病,2017年10月27日,世界卫生组织国际癌症研究机构公布幽门螺杆菌(感染)在一类致癌物清单中。我国每年新发胃癌50万人,大约有16万人死于胃癌。

 

预防和控制胃癌已日益引起人们的关注,2016年中华医学会消化疾病学分会幽门螺杆菌学组主办的Maastricht-V共识研讨会暨第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识会议,提出观点:

  • 根除幽门螺杆菌是利大于弊
  • 规范有效的根除是当务之急
  • 根除幽门螺杆菌预防胃癌是国之大策

专家们一致认为,及早发现幽门螺杆菌感染者,及时而有效地用抗菌素杀灭幽门螺杆菌,对预防和控制胃癌有重大意义。针对这一重大医学课题,鸿美诊断提出幽门螺杆菌液体培养和药敏分析试剂盒,可以有效解决中国幽门螺杆菌根治问题,大幅降低胃癌在中国的发生率。

幽门螺杆菌液体培养和药敏试剂盒样本展示

鸿美新型幽门螺杆菌液体培养和药敏试剂盒操作流程

一、胃粘膜活检组织的取材、培养

第一步:在胃镜室用无菌活检钳钳取胃粘膜活检组织标本2-3块。注意:取样点在非溃疡面。

第二步:10秒内用无菌针头将标本迅速挑进液体培养瓶中(标本不能长时间暴露在空气中),马上拧紧瓶盖。

第三步:放在胃粘膜活检组织的液体培养瓶在4小时内必须放入培养箱中,培养箱设置培养条件为37°C,二氧化碳浓度为10%,培养时间原则上不超过5天。

备注:整个操作过程中,病人胃粘膜活检组织接触的工具必须是无菌,否则会造成培养液污染。

二、幽门螺杆菌鉴定

放有标本的培养瓶培养2天开始观察菌液的浑浊度。

1.如果肉眼观察菌液有一定的浑浊度,则进行幽门螺杆菌鉴定,滴2滴酶促反应液和2滴酚红溶液至八排管孔内,再加20μl菌液吹打混匀,观察颜色变化情况:

(1)如果10分钟内由淡黄色变成红色或者紫罗兰色,证明幽门螺杆菌培养成功(阳性)。

(2)如果10分钟内没有颜色变化,则培养结果为阴性。

2.如果培养液澄清,则继续培养,如果培养时间达到5天培养液仍然澄清,则培养结果阴性。

三、接种药敏检测试剂盒

第一步:接种菌液

按照幽门螺杆菌药敏检测试剂盒说明书要求操作,药敏板的第1-11孔加入菌液,第12孔不加菌液做阴性对照。

第二步:药敏板培养

接种后的药敏板在幽门螺杆菌专用培养箱中(37°C,二氧化碳浓度为6~10%)培养3天,然后进行幽门螺杆菌药敏分析测试。

备注:幽门螺杆菌液体培养必须在二氧化碳培养箱(配置磁动力摇床)中完成,否则将影响分析结果。

四、幽门螺杆菌药敏分析

鸿美诊断的药敏检测产品选择用于幽门螺杆菌治疗的5种常用抗生素(阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑、呋喃唑酮、左氧氟沙星)进行耐药性分析,提供个性化的诊断报告,帮助临床医生制定精准的“三联”或“四联”用药治疗方案。

第一步:配制底物反应液(二选一)

  • 氧化酶反应液:1毫克底物四甲基苯二胺溶于1毫升纯净水中,混匀配制成为底物反应液,底物反应液应为无色(现用现配,如有变蓝则废弃)。
  • 尿素酶反应液:酶促反应液和酚红溶液按照1:1混匀配制成为底物反应液,底物反应液应为淡黄色(现用现配,如有变红则废弃)。

第二步:药敏测试

每个微孔中加入5μl底物反应液(优选氧化酶底物反应液),通常1分钟即可辨别出微孔中的变色情况。

  • 氧化酶法:如果变蓝色,则为阳性结果,说明幽门螺杆菌生长。如果不变色,则为阴性结果,说明幽门螺杆菌不生长。

图示为幽门螺杆菌标准菌株ATCC43504,氧化酶法药敏试验结果

  • 尿素酶法:如果变红或者紫罗兰色,则为阳性结果,说明幽门螺杆菌生长。如果不变色,则为阴性结果,说明幽门螺杆菌不生长。

图示为幽门螺杆菌标准菌株ATCC43504尿素酶法药敏试验结果

 第三步:检测报告

  • 若幽门螺杆菌在某种抗生素额低浓度和高浓度下培养都不能成长,判定为敏感,则该抗生素可以使用。
  • 若幽门螺杆菌在某种抗生素低浓度下培养能成长,高浓度培养不能成长,判定为中敏,建议医生谨慎使用该抗生素。
  • 若幽门螺杆菌在某种抗生素的低浓度和高浓度下培养都能生长,判定为耐药,则该抗生素不可以使用。

优势:5种抗生素的药敏检测报告,方便快捷;幽门螺杆菌液体培养技术使得培养药敏检测时间大大缩短。

四、鸿美诊断幽门螺杆菌药敏检测临床意义

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)是世界上流行范围最广的病原体,全世界大概有50%的人有HP感染史,而在我国Hp感染率是40%~60%,感染人数为6-8亿。

Hp主要引起胃肠道消化系统相关疾病,如慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌等。HP感染是引发胃癌的高危因子,《幽门螺杆菌胃炎京都全球共识》指出,根除Hp可降低胃癌的发生率。

幽门螺杆菌药敏检测完成阿莫西林、克拉霉素、左氧氟沙星、呋喃唑酮、甲硝唑等5种抗生素的耐药报告;幽门螺杆菌耐药性报告可以指导临床用药和指定个体化治疗方案,避免抗生素滥用和反复治疗失败。根据多次临床试验,通过鸿美诊断所提供的幽门螺杆菌药敏检测可帮助医生实现Hp根治率99%。

专利证书

专利号:ZL 2016 2 1132807.1

|幽门螺杆菌专用培养箱

幽门螺杆菌是一种革兰氏阴性菌,螺旋形、微需氧、对生长条件要求十分苛刻。主要分布在胃粘膜组织中,67%-80%的胃溃疡和95%的十二指肠溃疡是由幽门螺旋杆菌引起的。幽门螺杆菌是微需氧菌,稳定生长需要含10%的CO2。

由鸿美诊断独家研发的幽门螺杆菌专用培养箱采用分离式结构及先进的磁力驱动系统设计,实现幽门螺杆菌的自动化培养,省时省力,满足临床需求

 技术优势

  • 采用红外传感器检测CO2浓度,灵敏性搞,可靠性强;
  • 内置高效空气过滤系统,维持箱体内100级净化水平;
  • 便捷的高温(40°C)灭菌功能(90°C湿热灭菌可选);
  • 箱体内六面加热防止雾气及冷凝水的产生,温度均匀;
  • CO2浓度及温度过冲时自动声光报警;
  • 内胆采用镜面不锈钢材料,内部全圆角设计,便于清洗。

 技术参数 

专利证书

 

专利号:ZL 2019 2 0131402.3